動物行為實驗指南｜智能熱板儀測痛實驗測試方法及注意事項

儀器介紹

熱板裝置由一塊金屬板，微處理器控制的加熱裝置和帶蓋（有通氣孔）的透明圓柱形（直徑20 cm × 高度30cm）有機玻璃觀察室組成。顯示屏可以實時顯示金屬板的溫度。圓柱形觀察室用于將實驗動物限制在金屬板上并防止其從設備上跳下。建議選配攝像裝置用于輔助觀察和拍攝實驗用圖，也便于回溯分析。

智能熱板儀，型號：XR1700，上海欣軟

實驗動物的選擇

疼痛的動物模型受到多種調節因素的重要影響，包括性別、基因型和社會交流，在使用動物模型時必須考慮所有這些因素。

在實驗動物的性別上，熱板測試一定要選擇雌鼠，因為雄鼠是有睪丸的，實驗時陰囊的皮膚會不可避免地緊貼于金屬熱板，睪丸對熱的感受比爪子更敏感，因此產生了混淆效應。而且鼠會異常暴躁，影響實驗。疼痛研究中*常用的動物是實驗室大鼠，基本的熱板實驗可以選擇年輕的成年雌性Sprague Dawley大鼠。但是*近將這些疼痛模型應用于具有靶向基因突變的小鼠已被證明是一種強大的工具，然而，大鼠和小鼠的行為反應可能不同。正如Mogil等人簡潔地解釋的那樣，“小鼠不是小的大鼠”。如果**將已建立的大鼠模型應用于小鼠，請務必牢記這一點。

對于轉基因小鼠是否可以作為疼痛模型，雖然充滿了解釋的復雜性，但是轉基因技術改變了基本的疼痛研究，即使在沒有選擇性配體或抗體的情況下，也可以研究單個蛋白質在疼痛中的作用。這項技術也意味著許多實驗室已經從使用大鼠轉向使用小鼠了。這種轉變并非沒有代價：在許多實際方面，小鼠作為疼痛實驗對象不如大鼠。但廣泛使用轉基因小鼠的一個幸運結果是越來越關注遺傳背景對疼痛敏感性的影響。

1、實驗材料

1)*佳年齡的小鼠或大鼠（一般是6至8周）。

2)測試**和溶劑對照。

3)熱板裝置（可配備表面溫度計，用于校準和維護設備）。

2、適應

1)將動物從飼養室轉移到實驗室，稱重并記錄，讓動物適應實驗室環境至少半小時。

2)設置金屬板溫度與測試室的溫度匹配并清潔測試板表面。

3)將單個受試者動物放入測試小室中，不受干擾地探索15分鐘。

4)取出動物并清潔板表面的任何尿液或糞便。

3、測試

1)將熱板溫度設置為測試溫度，范圍通常在 50 °C～56 °C之間。

2)一旦達到預設溫度，將適應好的實驗動物放在熱板上。

3)測量**次出現傷害反應（例如，舔足，后爪抬起或跳躍）的潛伏期。設置終止時間，例如給藥后，動物沒有明顯的傷害感受反應，則必須在提前規定的終止時間后將動物從熱板上移開，以免對動物造成組織損傷。

4)出于倫理原因，出現傷害反應后應快速將動物從測試表面上移開，以避免不必要的痛苦和/或組織損傷。

5)將測試過的動物放入與未測試的動物分開的籠子中。大/小鼠可以通過各種嗅覺和超聲波系統進行交流，這可能是焦慮和恐懼的來源。

6)將測試板溫度恢復到室溫，并清潔金屬板的表面。

4、測試多種溫度

如果在多個溫度下測試相同的小鼠，則應將測試分開至少24小時，以避免壓力和重復測試對潛伏期時間的影響。

注意事項

1.可以預選30 s內有疼痛反應的動物進行實驗，將逃避、跳躍等不安定的實驗動物剔除。

2.實驗前一定要讓動物適應環境和裝置，暴露于新環境可能會掩蓋或改變潛伏期數據。

3.每只動物測試結束后一定要清潔金屬板，因為后爪上的尿液或糞便可能會改變測試板的傳熱特性，同時避免上一只動物的氣味對下一只測試動物的影響。

4.傷害性反應包括前爪縮回或舔舐，但不建議使用前爪的反應作為觀察指標，因為前爪通常參與梳理和探索行為，并且與金屬表面的接觸不一致。后爪縮回或舔舐被認為是傷害感受的更可靠指標。不過，簡單的后爪抬起也可能是由于梳理和探索。

5.不建議短時間內重復測試。在有害甚至無害的溫度下反復暴露于熱板測試可能降低行為反應的潛伏期。

在未加熱時對小鼠的“正?！毙袨檫M行觀測是必要的，以便可以注意到傷害性測試期間行為的任何差異。同樣重要的是要注意是否有任何其他因素可能影響疼痛行為，例如梳理、睡覺、排便或因噪音或光線水平的變化而分散注意力。

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